卵细胞质内单精子注射-广东精子库

(一)配子操作环境与IVF实验室配子/胚胎操作区域环境控制原则相同，并需按照技术规范，采取措施降[操作区域内挥发性有机化合物(volatile organic compounds，VOC)含量.

(二)人员

ICSI技术人员需按照规范要求在辅助生殖技术培训基地接受培训并考核合格，再经过物配子和人类配子操作训练后，具备熟练的显微操作及体外受精胚胎移植实验室技能。在续工作中还需进行持续质量控制。

(三)仪器

1.除IVF技术常规仪器外，需要增加倒置显微镜及显微操作系统。建议配置2套，以备修。显微操作系统可以是液压和/或气压系统。SI的中心需配备相关的设备。2.开展男科显微手术取精的中心需要配备相关显微显像及手术设备，开展冻精复苏后I

(四)耗材和试剂

1.除IVF常规用品外，还需要适宜管径的拆卵针(内径分别为450~500um、150~210um、130~140um的毛细管)、ICSI操作皿、无需CO,平衡的配子操作液(以下简称操乍液)、透明质酸酶、精子制动试剂如聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，PvP)。

2.注射针和固定针有0度角、20度角、25度角、30度角、35度角等多种角度，建议采用30度角。注射针的内径一般为5um，外径为7mm;固定针内径有15um和25um，外径均为10011

3.开展冷冻精子ICSI的中心需要精子冷冻及解冻试剂盒。

【ICSI操作的准备】

(一)精子的准备

1.射出精液处理同常规IVF，收集活动精子备用。

2.冷冻精子解冻后应用，参考精子冷冻解冻试剂盒说明。

3.附睾手术所取精子可直接装入注射皿或洗涤后使用，睾丸组织需要机械法拆碎曲精小管，制成精子悬液备用。

注:当精液中红细胞数量较多，精液黏稠度高或逆行射精标本建议行非连续密度梯度离心处理。

(二)卵母细胞的脱颗粒细胞

卵丘复合体移入透明质酸酶中，颗粒细胞松散后移入配子洗涤液中，用内径适宜的拆卵针反复吹吸，使颗粒细胞脱落。脱颗粒细胞过程中有如下事项需要注意.1.透明质酸酶使用参考试剂说明书，尽量减少透明质酸酶和卵子接触的时间(因各种酶制剂活性成分不同，如说明书中提及此时间需控制在1分钟之内，则需严格道照，如未提及具体时间眼制，亦不可过久)

2.脱颗粒后充分洗涤卵子。

3.如果卵子数较多(一般超过10枚以上)，建议分批处理。

(三)卵母细胞评估

去除颗粒细胞后，现察那母细胞，卵周间凉见策极体提示卵子核成款，可用于ICS、如现容发现GV期、入0期、特大极体(>14m)、巨肥(9P子直径>20mm)不给予ICS:发现多极体、胞质空泡等需记录。发现的周有唯过大极体碎裂及可疑多极体的卵子如有条件可使用纺锤体观测仪选择穿刺点。

全部卵子均为未成熟卵子时考虑行IVM后ICSI[实验室学组专家共识试行指南(2016)]。

(四)注射皿准备

可将精子制动液滴(如PVP微滴)置于注射皿中央，周围放置配子液微滴。用矿物油覆盖微滴。将处理后的精子悬液移入微滴，卵子逐个移入其余微滴。

注意每皿注射卵子数不宜过多(原则上可根据操作熟练程度，预计培养箱外操作时间不超过10分钟，减少室温对卵子产生的不利影响)。

(五)操作系统的调试

恒温合温度控制在37℃。调节注射针和固定针的手柄放置正中位置，旋细的指针处于正中位置。根据(CS注射针和固定针的规格角度调试两侧特针管的角度。装针前保证两侧特针管在同一天状面，然后在低告镜下安装注射针和固定之后转换高倍镜，再调整注射针和固定针的水平位置和垂直位置。注意如下事项:

1.显微控制系统非工作状态时，持针臂抬高。

2.液压系统更换时管道内不进空气，保证顺利通畅。