常规体外受精的准备与过程

受精是一个过程，标志新生命形成和胚胎产生，这个过程中除了精子与卵子融合，还经历了卵子激活、精子处理、基因编程与表观遗传印记、原核形成等过程。在受精过程中卵/卵母细胞对环境十分敏感。受精培养过程中保持环境相对稳定对正常受精与表观遗传具有重要意义，应当引起高度关注。

完成。4小时)。授精后的受精培养一般为16~20小时，去颗粒细胞观察原核。出现原核标志受精卵母细胞回收后，经过受精前培养，授精一般在注射HCG后40小时左右进行(约取卵

一、试剂和用品准备

(一)培养液配制

多数机构受精前卵母细胞培养、受精培养和胚胎卵裂期培养采用相同培养液。其准备L卵子的收集与评估。

受精培养器皿准备(二)

卵母细胞受精培养皿在取卵前6~24小时准备,

1.受精皿

受精直接在体积较大(通常1ml)的卵母细胞培养皿内进行，卵母细胞培养皿准备详见卵子的回收与评估。

(二)受精培养器皿准备

卵母细胞受精培养皿在取卵前6~24小时准备。

1.受精血

子的回收与评估。受精直接在体积较大(通常1ml)的卵母细胞培养皿内进行，卵母细胞培养皿准备详见

2.微滴受精培养皿

5%C0,、95%湿度、37℃平衡6小时以上或过夜待用。卵母细胞回收洗净后，按每微滴1枚卵母细胞，转入培养皿进行受精前培养,依据取卵预估数量，取φ35mm培养皿，底部分开加0.1ml微滴4~6滴，覆盖矿物油后置

(三)受精卵清洗皿和胚胎培养皿的准备

次日用的受精卵清洗皿和胚胎培养皿。受精卵清洗皿和胚胎培养皿在去颗粒细胞前6~24小时准备，多数机构在取卵后即准备女

1.受精卵清洗皿

95%湿度、37℃℃平衡6小时以上或过夜待用。用于去颗粒细胞和清洗胚胎。取35mm培养皿2个，每皿加入1ml受精液，置于5%CO

2.胚胎培养皿准备

见胚胎培养。

受精培养

(一)培养池受精培养为(100~300)x10’。在保温的条件下，取出卵母细胞培养皿，加入分离好的精子悬液[1~3)x10'/ml]0.1ml，继续5%CO2、95%湿度、37℃℃培养池受精是受精常用的方式，操作过程简洁。培养池受精的活性精子密度一般要求培养16~20小时去颗粒细胞观察原核。

微滴受精培养-)

夜(1x10'/ml)5ul，继续5%CO,、95%湿度、37℃C培养由于受精培养皿覆盖有矿物油，其受精环境相对稳定。微滴受精培养的精子密度一般要求为(30~50)x10’m1。在保温的条件下，取出卵母细胞培养皿，加入分离好的精子悬

16~20小时去颗粒细胞观察原核。

三、受精检查

受精检查是在体外受精培养16小时左右后进行，此时受精过程完成，原核尚未消失。

(一)去颗粒细胞

取出受精培养皿，此时颗粒细胞已经松散，但卵周颗粒细胞仍较为致密。将卵及黏附颗粒细胞移入到受精卵清洗皿，用φ=150mm微管吹打卵，直至颗粒细胞完全脱落。将卵在一清洗皿清洗后移入胚胎培养皿的小液滴内，观察受精

后继续培养。

(二)受精观察

将胚胎置于倒置显微镜，100~200倍放大观察原核。注意原核的数量、核仁结构、均一性等。也要注意极体情况。出现第二原核的受精卵，被认为是正常受精。

1.多原核为异常受精，胚胎不能利用。

2.单原核可能是由于父原核延迟产生、原核随极体排出、孤雌激活等所致，没有观察到正常受精的病例，可2~4小时再观察，看有无第二原核出现。

3.常规体外受精的患者，如果无双原核受精卵，可谨慎使用单原核受精卵形成的胚胎。

4.第二原核受精卵中，原核的形态、均一性、相互间的距离、核仁等在一定程度上可以预判胚胎的发育。但受到影响因素较多，与胚胎发育的关联性尚不十分确定，这里不做规范性要求。