精子成熟度的检查-广东精子银行

精子成熟过程中，精子核的鱼精蛋白间以二硫键结合，增加了精子头部的稳定性。随着游离的巯基在核中增加，稳定性也随之提高。人类精子通过附睾的时间有个体差异，因此评估精液中未成熟精子所占的比例可以预测男性生育力。当精子暴露于去污剂、十二烷基磺酸钠(SDS)时，未成熟核内较少的二硫键被解聚，精子头部肿胀并可能溶解。生育力正常的男性之间的抗解聚力也有很大的差异范围。

(一)精子核蛋白组型转换半定量试验

1.试验原理

精子成熟过程中与精核 DNA 结合的碱基蛋白发生组型转换，富含赖氨酸残基的组蛋!逐渐被富含精氨酸和胱氨酸残基的鱼精蛋白所取代。在酸性条件下，苯胺蓝与赖氨酸残基线合生成蓝色化合物，从而指示富含赖氨酸残基蛋白质的存在。反应完成后在油镜下计算200个精子，不成熟精子头部呈蓝色，计算头部着色精子的百分比。

丫啶橙染色也可区分正常和异常核染色的精子，丫啶橙与正常双股DNA结合，发出绿色荧光，与变性单股DNA结合则发出红色荧光。丫染色与苯胺蓝染色结果明显相关。

2.正常参考值

精子头部着色率<30%。

3.临床意义

精子在睾丸内发育的过程中，精原细胞和精母细胞内的核蛋白主要为体细胞型的组蛋，富含赖氨酸。到了精子细胞阶段，组蛋白则逐渐被富含精氨酸的鱼精蛋白所取代。鱼精蛋白能中和DNA电荷，并抑制RNA的合成，即能抑制基因的表达。

精子核携带着全部来自父方的遗传基因，这些基因必须在受精后才能开始表达，因此受精前这些基因在鱼精蛋白的特殊保护下，紧密浓集，不能有任何丢失或转录，否则将给子代带来遗传性疾患，这无疑是具有重要的生理意义的。核蛋白组型转换的缺陷，将影响精子核正常解聚，从而影响雌雄原核的融合，或影响胚卵的正常发育而造成不育或流产

(二)顶体和顶体反应的检测

透明带(ZP)以及一些化学因子如A23187等诱发。长期以来缺少评估人类精子顶体的简单方法，精子顶体很小，普通光镜不能检查，电人类精子顶体反应的生理学意义尚未被完全了解。人类精子顶体反应可以由卵泡、卵E观察的结果有较高的一致性。镜固然有效，但难以常规使用。许多新方法如三重染色、顶体成分单克隆抗体、金霉素荧》异硫氰酸盐标记的植物血凝素等相继在临床实验室开展，用这些方法检测出的结果与电镜

1.顶体素(Acrosin)和透明质酸酶测定

顶体含有许多水解酶，如顶体素(Acrosin)和透明质酸酶。测定人类精子顶体酶活性方法是用明胶或透明质酸覆盖平板，测量平板上因被精子头部酶消化而形成晕圈的直径由此判断蛋白酶的活性。由于平板上底物膜的厚度难以控制，该试验的临床价值尚待确定。

2.精子顶体酶活性定量检测

精子顶体内存在精氨酸酰胺酶，其活性可以反映顶体酶全部活性。精氨酸酰胺酶以N苯甲酰-DL-精氨酸-p-硝酰基苯胺(BAPNA)为底物，分解产生有色物--硝酰基苯胺，通寸测定该产物量来推算精氨酸酰胺酶的活性。

解酶、精子贴近卵泡透明带后的种属识别酶和促顶体酶存在于精子头部顶体内膜和赤道部膜上，它是精子受精过程中重要的酶系统E附睾分泌作用下，高尔基体转化为顶体酶，顶体酶是一组酶，包括驱散卵泡周围滤泡的水检测对精子质量的评估具有重要意义。已有临床报道，生殖道感染，尤其支原体、衣原体使雌雄原核融合的核融合酶。因此，正常的顶体酶在受孕过程中是非常重要的，顶体酶活性和病毒感染常可引起顶体酶发育的障碍。

(三)精子穿卵试验(SPA)

通过人类精子功能试验和生育力的临床评价对受孕率进行分析，目前广泛采用生命表逻辑回归分析是检验精子试验与生育力间有无显著相关性的最适当方法。由于自然妊率低，生育力低下组的情况则更低，要想积累足以用统计学处理的资料，必须随访多年。况且同一个人每次射精量和质量变异的范围很大以前精液分析结果与后来成功妊娠的精液在质量上可能有很大的差异。基于这种情况，要想明确体内受孕率与人类精子功能试验的相关性比较困难。而采取IVF(体外受精)评价常规精液分析和精子功能试验结果比较方便。在IF中平均受孕率为60%~80%，只需对少量的试验对象进行随访即可，且用同一份精液标本]时作精子检查和体外受精，因而IVF的结果与精液检查结果有直接联系。在目前情况下，IVF对研究精子功能仍然是有价值的。下面将分述

清子试验与IVF间的关系。

Z了一种与精子-ZP结合率试验相似的半带分析精卵细胞间相互作用的评估可能是评价人类精子受孕力的可靠方法。Liu等用体外受精失败的卵细胞作精子-ZP结合率试验，这种试验结果与IVF率显著相关。Burkman等建(HZA)试验。通过HZA获得的精子-ZP指数与IVF率明显相关。

结合精子浓度和运动率的改变，就能较好地评估生育力。生殖道感染时的其他辅助诊断方法还有:病原体的培养、免疫学检查、生化检査和影像学检査。病原体培养可以了解至病的原因;免疫学检测可以了解精浆中免疫的现状，估计感染的时态和机体反应的情况;生化检查的主要目的是通过检测各种副性腺分泌特征性产物来间接了解它们的功能与状态。当副性腺出现炎症时，其分泌功能必然受到影。在一定条件下选择一些辅助检查也是很有必要的。

临床意义:

1.精子浓度

ne进行一年随访，发现随精子浓度增加，妊娠率显著提高。但精子数持续大于250x106/m精子浓度小于20x106/mL时称作少精子症，并认为这样的男性生育力低下。Melbou的男性生育力也低下，其精子可能缺乏顶体反应能力。在IVF中仅需4x104~5x104/mL精子，少精子症每个治疗周期的受孕率与正常精夜相似。因此利用IVF进行体外受精对单纯少精子症是有效的方法。

2.精子活力和运动特征

精子活力小于50%或前向运动小于25%称为弱精症。尽管人们一直认为生育男性比不男性有更多的活动精子，但大量使用统计学的生命表法的研究表明，精子活力与受孕率关系不密切。活力仅对精子浓度低于每毫升1000万的患者有意义。Liu等的研究发现:IVF率与精子活力也无显著相关;而且精液常规检查活力的方法主观干扰因素太多，详细的运动特征也无法测定。客观评价精子活力的技术包#显微摄影、显微录像、连续曝光显微摄像等。计算机精液分析系统为精子运动特征--包括曲线速度(VCL)、直线速度(VSL)、头部则向位移(ALH)、尾部振动频率等提供了客观依据。Liu等人研究了108例精液和人工授精培养液中的精子活力与IVF率间的关系，认为VSI/VCL和VSL与IVF率显著相关;其他运动特征与IVF无关联。计算机自动分析系统为临床提供了一种客观评价精子活力的实用方法，但在准确程度方面可能仍存在一些问题。

3.精子形态

更好方法。Shorr染色法可提供非常清晰的精子形态，希望今后能够建立一种客观评估精子形态的

Liu等发现人的ZP对正常形态的精子具有高度选择性，附着ZP的精子80%~100%具有正常形态。由于标本制作和技术人员的经验的影响，精子形态的评估往往有很大的偏差。他门总结了1000多例IVF的资料后提出:正常形态的精子的比率始终是IVF成功率非常重要的因素。在IVF中仅需4x104~5x104/mL精子，!有效的评价方法。精子症每个治疗周期的受孕率与正常精液相似。因此，IVF是对体外受精和单纯少精子症最有效的评价方法。

前述的一些情子功能检验中与I率显著相关的是精子:2结合率试验、正常形态精子百分率和线性运动等。在正常形态精子减少的情况下，正常完整顶体精子的比例与IT有关，精子功能的其他检验项目如核成熟复检查、低多肿胀试验等虽与多项精液参数有明显相关，但与IVF率无明显关联，这些检查对人体精子某些特殊生理缺陷仍然有价值。

总之，常规清液分析是必需的，但它对生育力的预测是有局跟性的，新的精子功能过验会如精子形态学评估的改进，顶体状态、精子活力的客现评价和精子-2结合率对生育力的顶测有一定的价值，需进一步研究这些试验对预体内生育力的重要意义，在常规精液分析项目中增加这些功能过验，可能改进目前不孕症分类中对不明原因的诊断，用新的情子功能试验有可能晚定特殊的精子缺陷。进一步利用一些技术，铺远出具有正常形态、完整顶体、高线性运动和精子-ZP高结合力的精子，将能提高IVF成功率，也可以提示妊娠的因素，并进一步研究精子特征与受精过程的关系。