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IVM培养液是用来干嘛的?广东精子库精子卵子知识科普
2024-04-15
未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)培养目的是诱导源自中小卵泡直径2~10mm)中的卵母细胞完成体外成熟。在IVM培养条件下,这些卵母细胞由于减数裂恢复,在取卵后24~48小时成熟。IVM主要用以降低过高雌激素的副作用风险如血栓,减少用药量和经济负担。第一例IVM活产婴儿报道于1991年,目前全球由IVM技术活产的婴儿超过3于卵泡发育障碍、预防卵巢过度刺激综合征、FSH抵抗及生育力保存等情形。此外,还可000例。
一、IVM培养液
熟和胞质成熟。培养液由维持渗透压的离子缓冲底物、基于CO,的pH缓冲盐、人血清白蛋能量底物、氨基酸、维生素等基本成分和添加IVM培养液的设计主要目的是为卵母细胞提供适宜的继续发育环境,能够支持其核成剂构成。添加剂各不相同,包括抗氧自由基化合物、生长因子,促性腺激素,甾体激素卵母细胞分泌因子如激活素和抑制素等。
促性腺激素FSH是目前IVM培养液中常规添加的激素。卵母细胞离体后,胞质内cAM的颗粒细胞发育,提升卵母细胞内cAMP的浓度P浓度会迅速下降,会导致核成熟加速,与胞质成熟的不同步。FSH能够促进卵冠丘复合体促进卵母细胞胞质成熟。FSH添加的浓度较为固定,一般为75mU/m1。
有助于促进卵母细胞成熟。但由于颗粒细胞能够合成雌激素,添加雌激素并非必需。胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF-I)在有些培养皿中,LH和HCG亦常有添加,以拟体内的LH峰。IVM培养液添加雌激生效应。可以促进颗粒细胞的增殖和核成熟,表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)有助生发泡(germinal vesicle,GV)的降解和极体的排出,但需格外注意其可能对表观遗传学,
目前,市场上具有商业性的IVM培养液供应,二、IVM的实验步骤
(一)促卵泡发育与取卵
详见第四章第一、二节。
(二)卵母细胞回收
IVM卵泡冲洗液最好是富含氨基酸的缓冲液,以支持未成熟卵母细胞对代谢的需求。卵母细胞回收通过经超声介导下阴道穿刺术进行。吸取出的卵泡液迅速转移至IVM专用培关液中,以维持其发育潜能。因卵丘颗粒细胞极少,单纯在体视显微镜下肉眼寻找可能增加捡卵的难度和时间,经验不足者可使用细胞筛过滤后寻找。卵母细胞收集后置于特定的IVM培养液中培养,完成最后的成熟过程,并达到和胞质成熟同步。
(三)IVM的授精方式
取卵后24小时和48小时后观察卵母细胞状态,若COC变得松散,第一极体排出,判断卵母细胞成熟可进行授精。IVM周期一般可采用卵胞浆内单精子显微注射进行受精,
(四)IVM的胚胎培养
一般卵母细胞的IVM在5%CO2、95%湿度、37℃下培养,但研究表明5%CO2、5%090%N2、95%湿度、37℃下培养更有利于卵母细胞的功能,有条件的中心建议采用低氧音养条件,以模拟体内生理状态下的低氧环境IVM受精卵培养2~3天,依据患者子宫内膜状态挑选可移植胚胎进行移植和冷冻。时差成作(time lapse)培养,能够观测到一些异常的发育事件,有助于胚胎选择。
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