广东人类精子库体外受精胚胎移植及其衍生技术实验室技术操作规范

卵子收集前IVF实验室准备

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(一)患者病史记录

台疗周期中卵巢的反应、卵子数目和质量，受在取卵前应了解并记录患者夫妇的年龄、诊断、病史、卵泡数、雌二醇及精液情况。对于取精困难的患者，建议提前冻存精液备用。对反复IVF治疗失败的患者，应该注意患者前次精的方式、时间，受精情况及胚胎质量等细节，帮助临床医师分析找出失败的可能原因，并提出相应的改进方案及技术措施的实验室方面的意见和建议。对有传染病的患者，卵子收集中应注意自我保护和采取相应的隔离措施。

(二)培养液及培养皿的准备

取卵前一天预先平衡的培养液有:含蛋白的受精液和胚胎培养液、洗精液、矿物油。分别在培养皿和四孔皿(受精皿)中加入相应的培养液，并覆盖矿物油，在37℃C培养箱内平衡小理16~18小时待用。含有HEPES缓冲液及准备冲取卵针用的磷酸缓冲液(PBS)，提前30分钟置于37℃℃恒温箱中预热。

(三)工作站的准备

取卵手术前30分钟打开IVF工作站、恒温台和恒温试管架。卵子收集时用的巴斯德吸管酒精灯将毛糙的边缘加热至光滑，吸管不可拉至过细，以免挤压卵子或收集卵子时划伤卵子工作站中准备一个洁净无菌容器盛放废弃的卵泡液。台面放置无菌纱布，随时擦拭拾卵皿边缘或溅出至台面的血渍，卵子收集结束后使用洁净纱布擦拭台面。

卵子的收集二、

(一)卵子收集过程

将卵泡液倒入培养皿中，轻轻晃动液面使液体均匀分布在培养皿中。然后倾斜一小角度使液体相对集中，再按从前向后、从左向右的顺序迅速用肉眼或镜下识别卵丘-卵母细胞复合本(cumulus-oocyte complex，COC)，通常表现为半透明不定型的松散结构，卵子位于松散结构的中心，呈色深的球体。发现卵丘-卵母纸]胞复合体后在低倍体视显微镜下证实，然后用巴斯德吸管将COC从卵泡液中转移至盛有覆盖广物油的HEPES中，避免带入过多的卵泡液通过轻柔吹打、洗涤的方法在培养皿中洗去血液和卵泡液，用巴斯德吸管尽量去除卵子周围的血块和粗黑的颗粒细胞。为确保不遗漏卵子，须再晃动卵泡液重新分布，然后重复上述步聚，记录卵泡数、卵泡液量、性质、获卵数和卵子质量。如果卵子数与穿刺卵泡数相差太远，则需在体视显微镜下重新检查。其后用培养夜将HEPES洗净。卵子收集结束后，将所有COC转移至覆盖矿物油培养液的培养皿中培养4~小时，等待授精。

二)操作要求

1.采取适当措施确保在卵子的操作、观察过程中维持37℃℃。

2.在处理卵泡液、卵子颗粒细胞复合体均使用一次性耗材，每个阶段使用的批号应记录并保存。

3.移液设备(巴斯德管，拉制的吸液管，移液枪头等)应仅用于一个操作，并应在使用后立即处理。

4.杜绝在同一工作场所同时处理一个以上患者的标本。每个患者的标本应单独处理。

5.标记在培养皿(管)上标注患者夫妇的信息。必须保证患者在所有阶段的识别信息都是正确的。应合理安排培养箱以便于识别每个患者的卵子。

6.在操作的各阶段，均应记录日期、时间和操作者姓名、培养箱号。

7.在接收卵泡液标本前应核对患者身份信息。